BLI技術的動力學分析可用于檢測相互作用的親和力以及可逆的非共價結合的結合常數(shù)(kon)、解離常數(shù)(koff)以及親和力常數(shù)(KD)。典型的非共價結合由靜電作用、氫鍵、范德華力和疏水作用組成。分子之間的特異性相互作用對生物學的許多過程以及藥物研發(fā)至關重要。
憑借高通量、非標記、實時定量且無液路的特點,Octet?在大分子相互作用分析和生物藥研發(fā)領域具有突出優(yōu)勢。越來越多的高分文獻及應用實例證明了BLI技術在小分子、化合物片段、未知樣品垂釣、競爭分析等應用中表現(xiàn)優(yōu)異,傳感器分析模式也更容易開發(fā)靈活和創(chuàng)意的檢測方案。BLI技術在小分子互作分析的應用案例 BLI技術用于片段化合物篩選 基于生物傳感器的片段化合物篩選是藥物研發(fā)過程中一個非常具有價值的工具。這種方法優(yōu)于許多其他的生化方法,因為苗頭化合物可有效地通過具體的結合圖譜以及響應值從非特異性或非理想的相互作用中區(qū)分開來,從而降低假陽性。BLI技術通過監(jiān)測生物分子結合導致的光的干涉圖譜的變化實現(xiàn)分子間的相互作用的實時檢測。 Charles A. Wartchow等將重組表達純化得到AVI-Tag生物素標記的蛋白或通過體外的方式標記生物素(biotin-LC-LC-NHS)固化至鏈酶親和素傳感器上。通過緩沖液建立基線噪音信號,以基線噪音信號的3倍標準差為閾值篩選苗頭化合物。使用了包含6500種化合物的片段文庫,以BCL-2、JNK1、eIF4E等蛋白為靶點進行了篩選,比較了這些靶點的苗頭化合物的比率。 Francesca E. Morreale等同時使用差示掃描熒光(DSF)和BLI技術篩選E2泛素連接酶Ube2T的抑制劑。將Ube2T固化在鏈霉親和素傳感器上,對片段庫的化合物進行篩選。利用DSF方法篩選出4種化合物,而采用BLI方法也篩選出4種化合物,其中有2種是同時用兩種方法都篩選了出來。所有六種化合物用核磁共振(NMR)進行了驗證并確認這些化合物在靶點蛋白上的結合位點。